化學(xué)品哺乳動(dòng)物骨髓染色體畸變?cè)囼?yàn)檢測(cè)是以嚙齒類動(dòng)物骨髓細(xì)胞為靶標(biāo)的體內(nèi)遺傳毒性檢測(cè)方法，主要用于判斷化學(xué)品能否引起體細(xì)胞染色體結(jié)構(gòu)損傷。檢測(cè)流程覆蓋樣品制備與劑量設(shè)計(jì)、動(dòng)物給藥與取材、染色體標(biāo)本制備、畸變分析以及結(jié)果判定等環(huán)節(jié)。該試驗(yàn)依據(jù)化學(xué)品登記與安全性評(píng)價(jià)的技術(shù)規(guī)范執(zhí)行，其結(jié)果構(gòu)成化學(xué)品遺傳毒性篩查的重要組成部分，可用于補(bǔ)充體外試驗(yàn)結(jié)論并支持危險(xiǎn)性評(píng)估。

檢測(cè)原理與機(jī)制

哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞具有旺盛的分裂增殖能力，其中中期分裂細(xì)胞可直接呈現(xiàn)染色體的形態(tài)狀態(tài)。化學(xué)品經(jīng)吸收進(jìn)入體循環(huán)后，其原形或代謝產(chǎn)物可作用于骨髓分裂期細(xì)胞，引起染色體斷裂、斷片重接或著絲粒異常等損傷。秋水仙素類紡錘體抑制劑可使分裂細(xì)胞停滯于中期，便于在光鏡下觀察染色體數(shù)目與結(jié)構(gòu)的固有形態(tài)。據(jù)此，試驗(yàn)以骨髓中期相染色體為觀察對(duì)象，判定受試物在體內(nèi)條件下是否具有誘發(fā)染色體畸變的潛能。

檢測(cè)原理與終點(diǎn)指標(biāo)

本試驗(yàn)的核心觀察終點(diǎn)為染色體結(jié)構(gòu)畸變，裂隙、斷裂、斷片、微小體、環(huán)狀染色體、雙著絲粒染色體以及易位等類型。判斷時(shí)區(qū)分染色單體型畸變與染色體型畸變，分別記錄發(fā)生各類畸變的細(xì)胞數(shù)與畸變總數(shù)。每只動(dòng)物通常分析一定數(shù)量的中期分裂相，以含畸變的細(xì)胞百分比作為主要定量指標(biāo)。處于分裂間期細(xì)胞的微核、核碎裂等改變不屬于本試驗(yàn)終點(diǎn)，須在計(jì)數(shù)時(shí)剔除。終點(diǎn)數(shù)據(jù)與陰性對(duì)照及陽性對(duì)照比較，構(gòu)成判定受試物遺傳毒性的直接證據(jù)。

樣品制備與動(dòng)物給藥設(shè)計(jì)

受試物應(yīng)溶于或均勻懸浮于適宜介質(zhì)，常用溶媒注射用水、生理鹽水、羧甲基纖維素鈉懸浮液及二甲基亞砜等，須確認(rèn)其對(duì)細(xì)胞無毒性且不干擾觀察。給藥途徑一般采用經(jīng)口灌胃，亦可依據(jù)化學(xué)品預(yù)期的接觸方式選用經(jīng)皮或吸入途徑。試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照、陽性對(duì)照及至少三個(gè)劑量組，高劑量以大耐受劑量或劑量限制劑量為原則，按一定間隔設(shè)置中、低劑量。通常采用急性給藥方案，必要時(shí)增設(shè)亞急性重復(fù)給藥設(shè)計(jì)。嚙齒類動(dòng)物于給藥后間隔取材，覆蓋一個(gè)以上細(xì)胞分裂周期。

染色體標(biāo)本制備與畸變分析方法

動(dòng)物于處死前經(jīng)腹腔注射秋水仙素，使骨髓細(xì)胞阻斷于中期。取股骨骨髓，經(jīng)低滲處理使細(xì)胞膨脹，隨后以固定液反復(fù)固定。采用空氣干燥法制片，吉姆薩染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察。分析時(shí)先在低倍鏡下選取形態(tài)完整、分散良好的中期分裂相，再以油鏡逐條核對(duì)染色體形態(tài)。凡出現(xiàn)斷裂、斷片、環(huán)狀、雙著絲粒或易位等改變，須按類型登記，并由第二分析人員復(fù)核存疑圖像。每張標(biāo)本的分裂相數(shù)目、染色質(zhì)量及背景清潔度均須符合閱片要求。

試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)與結(jié)果評(píng)價(jià)

結(jié)果評(píng)價(jià)以畸變細(xì)胞率為主要指標(biāo)，將各劑量組與同期陰性對(duì)照進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，并考察劑量—反應(yīng)關(guān)系與結(jié)果的重復(fù)性。陽性對(duì)照須呈現(xiàn)明確的畸變率升高，陰性對(duì)照畸變率應(yīng)處于本實(shí)驗(yàn)室歷史對(duì)照范圍之內(nèi)，否則試驗(yàn)視為無效。若一個(gè)以上劑量組畸變率升高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義并呈劑量相關(guān)性，可判定為陽性結(jié)果；僅在單一劑量出現(xiàn)孤立升高時(shí)，須重復(fù)試驗(yàn)予以確認(rèn)。評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)結(jié)合細(xì)胞毒性、給藥方案及體內(nèi)代謝特點(diǎn)，審慎解釋邊緣性結(jié)果。

適用范圍與化學(xué)品毒性篩查應(yīng)用

本試驗(yàn)適用于各類工業(yè)化學(xué)品、農(nóng)藥原藥及制劑、新材料以及其他需開展安全性評(píng)價(jià)的化學(xué)物質(zhì)，尤其適合經(jīng)過代謝活化方表現(xiàn)遺傳毒性的受檢對(duì)象。作為體內(nèi)試驗(yàn)，其結(jié)果可反映吸收、分布與代謝對(duì)毒效應(yīng)的調(diào)節(jié)，常用于核實(shí)體外染色體畸變?cè)囼?yàn)或細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)的陽性結(jié)論。在化學(xué)品登記、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及優(yōu)先級(jí)排序中，該試驗(yàn)與微核試驗(yàn)、生殖細(xì)胞畸變?cè)囼?yàn)共同構(gòu)成互補(bǔ)的遺傳毒性檢測(cè)組合，據(jù)此判定受試物是否需要進(jìn)一步開展深入試驗(yàn)。